對于西安市無菌檢驗(yàn)員培訓(xùn)學(xué)員來說，稀釋涂布平板法是微生物學(xué)中常用的分離和計(jì)數(shù)微生物的方法，但在實(shí)際操作中常存在一些誤區(qū)，可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)確甚至失敗。以下是幾個常見的誤區(qū)及其解析，一起看正文。
西安市無菌檢驗(yàn)員培訓(xùn)知識之稀釋涂布平板法常見誤區(qū)
1.稀釋液未充分混勻
誤區(qū):稀釋過程中未充分振蕩或混勻菌液，導(dǎo)致菌體分布不均。
后果:同一稀釋度的不同平板菌落數(shù)差異大，統(tǒng)計(jì)結(jié)果不可靠
正確做法:每次稀釋后必須充分振蕩試管(或渦旋混勻)，確保菌體均勻分散。
2.涂布棒未冷卻直接使用
誤區(qū):酒精浸泡或火焰滅菌后的涂布棒未冷卻就接觸菌液，導(dǎo)致微生物被高溫殺死。
后果:涂布后菌落數(shù)顯著減少，甚至無生長。
正確做法:滅菌后的涂布棒需在酒精中冷卻，或短暫觸碰無菌培養(yǎng)基表面降溫后再使用
3.涂布不均勻或用力過猛
誤區(qū):涂布時用力過猛或未旋轉(zhuǎn)平板，導(dǎo)致菌液分布不均或培養(yǎng)基表面破損
后果:菌落成片生長或無法形成單菌落，
避免劃破培養(yǎng)基。正確做法:輕緩?fù)坎迹瑫r旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿，使菌液均勻分布，
4.稀釋梯度選擇不當(dāng)
誤區(qū):僅選擇1-2個稀釋度，未覆蓋目標(biāo)菌的濃度范圍。
后果:高稀釋度下菌落過少，低稀釋度下菌落重疊無法計(jì)數(shù)。
正確做法:預(yù)先預(yù)估菌液濃度，設(shè)置3-5個連續(xù)稀釋梯度(如10-5、10-6、10-7等)，確保至少有一個稀釋度的平板菌落數(shù)在30-300之間(適用于計(jì)數(shù))。
5.忽略靜置吸收步驟
誤區(qū):涂布后未等待菌液被培養(yǎng)基吸收，直接倒置培養(yǎng)
后果:菌液流動導(dǎo)致菌落分布不均或污染。
正確做法:涂布后將平板靜置10-15分鐘，待菌液完全吸收后再倒置培養(yǎng)。
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