對于湖州無菌檢驗(yàn)員培訓(xùn)學(xué)員來說，掌握傾注平板法是基本要求。待分離微生物樣品經(jīng)過一系列梯度（一般10倍遞增）稀釋后，使微生物菌體充分分散，成為單細(xì)胞，然后再取出一定量稀釋液和固體培養(yǎng)基混勻，傾注到固體培養(yǎng)基的方法，再經(jīng)過適宜的培養(yǎng)條件，形成單菌落的過程。
一、湖州無菌檢驗(yàn)員培訓(xùn)內(nèi)容之傾注平板法步驟
1.制備培養(yǎng)基：準(zhǔn)備固體培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿，高壓蒸汽滅菌鍋滅菌后固體培養(yǎng)基放置于水浴鍋中備用。
2.標(biāo)記：將事先制備好的無菌平板上標(biāo)記10-7、10-8、10-9，每一個(gè)梯度稀釋設(shè)置三個(gè)重復(fù)。
3.傾注：將固體培養(yǎng)基冷卻至適合溫度后，用無菌移液器吸取10-7稀釋液0.1mL放入固體培養(yǎng)基中混勻，然后倒入編號10-7的3個(gè)培養(yǎng)皿中，或者用無菌移液器吸取10-7稀釋液0.1mL放入編號10-7的3個(gè)平板中，倒固體培養(yǎng)基，在培養(yǎng)皿中混勻。
4.繼續(xù)傾注：同樣傾注10-8稀釋液和10-9稀釋液。
5.培養(yǎng)：將傾注好的平板平放于超凈臺上靜置，待凝固后，將平板放置于恒溫培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)。
6.計(jì)數(shù)：待長出單菌落后即可計(jì)數(shù)。
7.菌落計(jì)數(shù)：同平板稀釋法。
二、傾注平板法操作技巧
1.固體培養(yǎng)基溫度不宜過高，過高會燙死微生物；溫度也不能太低，容易凝固結(jié)塊，無法和稀釋液混勻。
如何確定合適的溫度？
用手心手背觸摸培養(yǎng)基，手心不燙手背燙的溫度，基本就是50℃左右（不同人溫度敏感性有一定差異）。
根據(jù)不同目標(biāo)菌種，確定合適的溫度，但一定要考慮固體培養(yǎng)基凝固的溫度，一般40℃左右凝固。
2.培養(yǎng)基和稀釋液混勻過程中，沿壁搖勻，以免產(chǎn)生起泡，影響觀察和美觀。
沿壁搖勻，能夠保證培養(yǎng)基和稀釋液充分混合，也不會產(chǎn)生氣泡，切勿猛烈搖晃，氣泡太多，制成的平板無法計(jì)數(shù)。
3.梯度稀釋過程，一般用試管，試管長度要適宜，不宜過長，不方便操作，也不宜過短，無法搖勻或容易溢出。
4.為了操作方便，可以采用離心管代替試管進(jìn)行梯度稀釋，上下顛倒，容易混勻。
5.實(shí)驗(yàn)過程中用到的無菌水是無菌生理鹽水，保護(hù)細(xì)胞。
三、傾注平板法注意事項(xiàng)
1.整個(gè)過程，需要在無菌環(huán)境下進(jìn)行。
2.固體培養(yǎng)基放置在水浴鍋中，也要經(jīng)常搖動，不能靜置。
3.如果發(fā)現(xiàn)平板上水太多，處理后再使用。
4.切記寫清楚標(biāo)記。
5.試驗(yàn)完畢，注意灼燒涂布器，以免影響環(huán)境，造成交叉污染。
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