對(duì)于安徽省蚌埠市無(wú)菌檢驗(yàn)員培訓(xùn)學(xué)員來(lái)說(shuō)，穿刺保藏法和活化是常見(jiàn)菌種保藏及活化技術(shù)之一，也是無(wú)菌檢驗(yàn)員培訓(xùn)學(xué)員應(yīng)知應(yīng)會(huì)知識(shí)，和無(wú)菌檢驗(yàn)人員的基本技能之一，因此，今天寫個(gè)文章，說(shuō)說(shuō)這個(gè)事兒。
安徽省蚌埠市無(wú)菌檢驗(yàn)員培訓(xùn)知識(shí)之穿刺保藏法和活化
1.穿刺保藏法操作步驟
穿刺保藏法原理是缺氧和低溫，即菌種保存在半固體培養(yǎng)基內(nèi)部，造成缺氧環(huán)境，然后保存于4℃，延長(zhǎng)菌種時(shí)間。
(1)制備半固體培養(yǎng)基
半固體培養(yǎng)基跟固體培養(yǎng)基的區(qū)別在于瓊脂粉含量不同，前者瓊脂粉含量1%，后者含量1.5%-2%。
半固體培養(yǎng)基添加至無(wú)菌試管約1/3處，營(yíng)養(yǎng)不宜太豐富。
值得注意的是，半固體培養(yǎng)基配制好后需要豎起來(lái)，不需要擺斜面。
(2)接種
用接種針挑取少量細(xì)菌，從半固體培養(yǎng)基的中心垂直刺入，直至接近半固體培養(yǎng)基1/2處自上而下穿刺，不要穿透，然后沿原穿刺線將接種針退出，穿入培養(yǎng)基若干次，放置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待微生物生長(zhǎng)良好后，用2毫米無(wú)菌液體石蠟覆蓋，以創(chuàng)造缺氧環(huán)境并4℃保藏。
(3)保藏時(shí)間
一般3-6月后轉(zhuǎn)種。
有的菌種保存時(shí)間至少可以達(dá)到1 年，有的菌種甚至能達(dá)到20 年之久。
(4)穿刺保藏法適用對(duì)象
適用于工程大腸桿菌等細(xì)菌，操作簡(jiǎn)便，保存時(shí)間較長(zhǎng)。
(5)穿刺保藏法優(yōu)點(diǎn)
操作簡(jiǎn)便，保存時(shí)間比斜面保藏法長(zhǎng)。
(6)穿刺保藏法缺點(diǎn)
比較耗費(fèi)空間，不便于攜帶。
2.穿刺保藏菌種活化
用接種環(huán)沿著菌種方向穿入，挑取菌種，轉(zhuǎn)接至斜面上或平板培養(yǎng)基上，或加入無(wú)菌水搖晃，稀釋涂布即可。
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