上一篇文章為大家講解了菌種斜面保藏和活化方法,今天繼續(xù)來(lái)為安徽省蚌埠市無(wú)菌檢驗(yàn)員培訓(xùn)學(xué)員講解另外一種菌種保藏和活化方法,即甘油管保藏法和活化,一起看正文。

安徽省蚌埠市無(wú)菌檢驗(yàn)員培訓(xùn)知識(shí)之菌種甘油管保藏法和活化
1.甘油管保藏法操作步驟
甘油管保藏是實(shí)驗(yàn)室常用的菌種保藏方法,它的原理在于,一定濃度的甘油,可以降低水的結(jié)冰溫度,有效地防止細(xì)胞內(nèi)部形成冰晶,甘油還可以與細(xì)胞內(nèi)部分子結(jié)合,從而形成細(xì)胞的保護(hù)層,起到保護(hù)細(xì)胞的作用。此外,甘油還是一種有機(jī)碳源,可以為細(xì)胞提供一定量的碳源和能源,使其保持活力狀態(tài)。參考復(fù)習(xí)筆記9:微生物的營(yíng)養(yǎng)成分和培養(yǎng)基類型
甘油比較粘稠,一般采用質(zhì)量比配制即可。
甘油管保藏法中,甘油的終濃度20%-30%即可。
值得注意的是,配好后一定要混勻,甘油密度比較大,會(huì)沉淀到底部,如果不混勻,滅菌效果可能不太好。
(2)甘油管保藏
液體菌種:將培養(yǎng)好的液體菌種和甘油按比例混勻,一般甘油的終濃度20%-30%。
我一般使用50%甘油和菌液1:1混勻,-80℃保藏即可。
平板或斜面菌種:用無(wú)菌水重懸菌種后,與50%甘油1:1混勻,-80℃保藏即可。
通常使用甘油的終濃度在20%~30%,該范圍外的濃度會(huì)對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性,質(zhì)粒會(huì)很容易丟失,甘油濃度太低起不到作用,太高又會(huì)影響菌種活性。
一般保藏時(shí)間為一年。在實(shí)際操作中,一年以上也沒(méi)問(wèn)題。操作簡(jiǎn)單,保藏期較長(zhǎng),菌種不容易發(fā)生變異。不容易觀察,不易監(jiān)測(cè)菌種變化,不宜反復(fù)凍融。將甘油管從-80℃取出,融化后,直接用接種環(huán)挑取一環(huán),采用劃線法在固體培養(yǎng)基上劃線,適宜溫度下倒置培養(yǎng)即可?;蛘哂脽o(wú)菌水適當(dāng)稀釋后涂布至平板培養(yǎng)基中,培養(yǎng)。
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