對(duì)于四川省無菌檢驗(yàn)員培訓(xùn)學(xué)員來說，了解無菌檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作是應(yīng)知應(yīng)會(huì)內(nèi)容，標(biāo)準(zhǔn)操作將幫助無菌檢驗(yàn)人員得到可靠、可信結(jié)果，進(jìn)而為無菌產(chǎn)品、無菌器械質(zhì)量保證提供支持。
四川省無菌檢驗(yàn)員培訓(xùn)知識(shí)之無菌檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作
一、明確目的
無菌檢驗(yàn)是指檢查經(jīng)滅菌方法處理后的醫(yī)療器械(具)、植入物品、敷料等是否達(dá)到無菌標(biāo)準(zhǔn)的一種方法。臨床部門不應(yīng)常規(guī)進(jìn)行無菌檢驗(yàn)，如有需要，可聯(lián)系當(dāng)?shù)丶膊☆A(yù)防控制中心派專人來采樣檢測(cè)。
二、試驗(yàn)前準(zhǔn)備
1．無菌檢驗(yàn)應(yīng)在潔凈度為100級(jí)以上的潔凈實(shí)驗(yàn)室內(nèi)實(shí)施，并證實(shí)該實(shí)驗(yàn)室各項(xiàng)指標(biāo)符合GB50073—2001《潔凈廠房設(shè)計(jì)規(guī)范》、GB／T16292～16294—1996《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室(區(qū))懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測(cè)試方法》等相關(guān)要求，且在有效期范圍之內(nèi)。
2．按衛(wèi)生部《消毒技術(shù)規(guī)范》(2002年版)制備無菌檢驗(yàn)用洗脫液、需氧一厭氧培養(yǎng)基與真菌培養(yǎng)基(見附)。
3．在無菌檢驗(yàn)前三日，分別在需氧一厭氧培養(yǎng)基與真菌培養(yǎng)基內(nèi)各接種1ml洗脫液，分別置30～35℃與20～25℃：培養(yǎng)72h，應(yīng)無菌生長(zhǎng)。
4．陽(yáng)性對(duì)照管菌液制備：
(1)在檢驗(yàn)前一天取金黃色葡萄球菌[CMCC(B)26003]的普通瓊脂斜面新鮮培養(yǎng)物，接種一環(huán)至需氧一厭氧培養(yǎng)基內(nèi)，在30～35℃培養(yǎng)16～18h后，用0．9％無菌氯化鈉溶液稀釋至10～100cfu／ml(可通過比濁法或稀釋后用1m1接種平板來確認(rèn))。
(2)取生孢梭菌[CMCC(B)64941]的需氧菌、厭氧菌培養(yǎng)基新鮮培養(yǎng)物一接種環(huán)種于相同培養(yǎng)基內(nèi)，于30～35℃培養(yǎng)18～24h后，用0.85％無菌氯化鈉溶液稀釋至10～100cfu／ml。
(3)取白念珠菌[CMCC(F)98001]真菌瓊脂培養(yǎng)基斜面新鮮培養(yǎng)物一接種環(huán)種于相同培養(yǎng)基內(nèi)，于20～25℃培養(yǎng)24h后，用0．85％無菌氯化鈉溶液稀釋至10～100cfu／ml。
三、樣本制備
根據(jù)檢樣的類型與大小，以及帶孔(腔)與否，可以按照以下不同的方法進(jìn)行制備。
1．敷料類等非管道類樣品：取2個(gè)包裝內(nèi)的樣本，剪成約10mm×30mm大小的樣片21片，接種需氧一厭氧菌培養(yǎng)管5管與真菌培養(yǎng)管2管。每培養(yǎng)管含培養(yǎng)基40m1，各接種3片樣片。
2．注射針、針灸針、縫合針、棉簽等小樣本：可直接接種需氧一厭氧菌培養(yǎng)管5管與真菌培養(yǎng)管2管。每管含培養(yǎng)基15ml。
3．對(duì)不能用破壞性方法取樣的特殊醫(yī)療用品可用浸有洗脫液的無菌棉拭子涂抹采樣，被采表面<100cm時(shí)采樣全部表面，被采表面≥100cm時(shí)采樣面積為100cm。
4．輸液(血)器等導(dǎo)管類樣本：選7支樣本，以無菌注射器吸取5.O～10.Oml無菌洗脫液注入管內(nèi)往返搖蕩5次。將樣本洗脫液分別接種需氧一厭氧菌培養(yǎng)管5管與真菌培養(yǎng)管2管。培養(yǎng)管含培養(yǎng)基15ml，每管接種樣本洗脫液1.0ml。
5．注射器樣本：選7支樣本，吸取洗脫液2.O～10.0ml，將芯桿抽取至全程刻度，振搖5次。將各管洗脫液分別接種需氧一厭氧菌培養(yǎng)管5管與真菌培養(yǎng)管2管。其中洗脫液接種量分別為：1ml注射器0.5ml；2ml注射器1.0m1；5～10m1注射器2.0ml；20～50ml注射器5.0m1。培養(yǎng)基含量按以下標(biāo)準(zhǔn)選擇：洗脫液接種量在2m1以下者，每管為15ml；接種量在5ml者，每管為40ml。
6．其他樣本：不能用上述方法處理的，可用浸有洗脫液的無菌棉拭子涂抹法采樣。每個(gè)樣本涂采面積不得少于25c㎡。采樣后將棉簽直接剪入培養(yǎng)管中。每次檢測(cè)7個(gè)樣本，分別接種需氧一厭氧菌培養(yǎng)管5管與真菌培養(yǎng)管2管，每支培養(yǎng)管含培養(yǎng)基15mL。
四、樣本培養(yǎng)
在不同樣本制備過程中，都必須在其中一支加有樣本的需氧一厭氧菌培養(yǎng)管中接種預(yù)先準(zhǔn)備的1：1000稀釋的金黃色葡萄球菌1ml，以作為陽(yáng)性對(duì)照管。將含有檢樣的需氧一厭氧培養(yǎng)管以及陽(yáng)性與陰性對(duì)照管均于30～35℃培養(yǎng)5日；含有檢樣的真菌培養(yǎng)管與陰性對(duì)照管于20～25℃培養(yǎng)7日。培養(yǎng)期間逐日檢查是否有菌生長(zhǎng)，如加入檢樣的培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁或沉淀，經(jīng)培養(yǎng)后不能從外觀上判斷時(shí)，可取培養(yǎng)液轉(zhuǎn)種入另一支相同的培養(yǎng)基中或斜面培養(yǎng)基上，培養(yǎng)48～72h后，觀察是否再現(xiàn)渾濁或在斜面上有無菌落生長(zhǎng)，并在轉(zhuǎn)種的同時(shí)，取培養(yǎng)液少量，涂片染色，用顯微鏡觀察是否有菌生長(zhǎng)。
五、結(jié)果判定
陽(yáng)性對(duì)照在24h內(nèi)應(yīng)有菌生長(zhǎng)，陰性對(duì)照在培養(yǎng)期間應(yīng)無菌生長(zhǎng)，如需氧一厭氧菌及真菌培養(yǎng)管內(nèi)均為澄清或雖顯渾濁但經(jīng)證明無菌生長(zhǎng)(接種管內(nèi)液體到相應(yīng)的培養(yǎng)皿，以證實(shí)是否有菌生長(zhǎng)，培養(yǎng)時(shí)間不得少于48h)，判為滅菌合格；如在7支需/厭氧菌及真菌培養(yǎng)管中，任何1支顯示出渾濁現(xiàn)象，并證實(shí)有菌生長(zhǎng)，應(yīng)重新取樣，分別用同樣方法復(fù)試2次。除陽(yáng)性對(duì)照外，其他各管均不得有菌生長(zhǎng)，否則判為滅菌不合格。
無菌試驗(yàn)結(jié)果為合格，應(yīng)報(bào)告：未檢出需氧/厭氧菌及真菌；不合格報(bào)告，則報(bào)告為：檢出需氧一厭氧菌或(及)真菌。如有四川省無菌檢驗(yàn)員培訓(xùn)報(bào)名需求，歡迎您隨時(shí)方便與檢驗(yàn)員培訓(xùn)網(wǎng)聯(lián)絡(luò)，聯(lián)系人：呂工，電話：18868735317，微信同。