微生物檢驗(yàn)-細(xì)菌計(jì)數(shù)（二十三）
發(fā)布時(shí)間:2022-02-26瀏覽：1262
計(jì)數(shù)板法
本法采用血球計(jì)數(shù)板或其他計(jì)數(shù)板進(jìn)行細(xì)菌計(jì)數(shù)。在我國常用有托馬及改良的紐氏計(jì)數(shù)板?，F(xiàn)以改良的紐氏計(jì)數(shù)板為例說明如下∶
1. 改良的紐氏計(jì)數(shù)板 為一長方形厚載玻片。中央部位前后各有一個(gè)計(jì)數(shù)池，上有刻線。每池為9大方格，共為9mm2，每一大格其面積為1mm2，深度為0.1mm，中央的大方格分成400個(gè)小方格，在縱橫第1、5、9、13、21行列中各加一條劃線，使成雙線。這樣將大方格分成25個(gè)中方格，每一中方格中有16個(gè)小方格，總計(jì)400個(gè)小方格。
2.測定菌數(shù)的步驟
（1）制備含菌量適宜的樣品供試液;
（2）清潔計(jì)數(shù)池，并蓋上與計(jì)數(shù)池配套的蓋玻片，以毛細(xì)滴管將供試液謹(jǐn)慎地從計(jì)數(shù)池側(cè)面滲入計(jì)數(shù)池內(nèi)，切勿使池內(nèi)存留氣泡。稍待片刻，使菌體沉降，再以高倍物鏡進(jìn)行計(jì)數(shù);
（3）計(jì)數(shù)有兩種方式∶
①實(shí)數(shù)法∶即計(jì)數(shù)全部400個(gè)小方格內(nèi)的菌體細(xì)胞數(shù)。供試液含菌量/ml=全部40 小方格內(nèi)菌數(shù)總和，再乘以104。
②定點(diǎn)計(jì)數(shù)法∶計(jì)數(shù)方格的四角及中央5個(gè)中方格，共計(jì)80個(gè)小格中的菌數(shù)。供試液含菌量/ml=80小方格菌數(shù)總和，再乘以5× 104。
應(yīng)指出，計(jì)數(shù)時(shí)應(yīng)按一定順序進(jìn)行，對于壓線菌細(xì)胞，可按計(jì)數(shù)上與左，不數(shù)右與下的原則、以免重復(fù)計(jì)數(shù)。
計(jì)數(shù)板法是計(jì)算總數(shù)的方法，是按形態(tài)特征計(jì)數(shù)，不分"死菌"與"活菌"。所以不是活菌計(jì)數(shù)。有時(shí)也可以用染色法區(qū)分"死菌"與"活菌"，加以計(jì)數(shù)。但染色活菌不一定是具繁殖力的菌細(xì)胞。因此，染色活菌與平板法、MPN法的活菌是不能等同的。本法不僅適用于細(xì)菌計(jì)數(shù)、也適用于酵母菌及霉菌孢子計(jì)數(shù)。但因各種技術(shù)原因，如滴樣方法、供試液的均勻程度，菌體（孢子）的成叢性、觀察液層焦點(diǎn)視野厚度不一以及細(xì)菌運(yùn)動等、均可引起計(jì)數(shù)的誤差，同時(shí)本法僅適用于染菌量大的供試品。此法誤差大、但其設(shè)備簡單，方法易行。