試管稀釋法(試管法、MPN 法)
1. 稀釋法原理 將未知菌量的供試液以一定倍數(shù)(如10倍)逐級(jí)稀釋后,取定量稀釋液分別接種數(shù)支(如5支)裝有固定量培養(yǎng)基的試管中,經(jīng)培養(yǎng)后,根據(jù)生長(zhǎng)管數(shù),按數(shù)理統(tǒng)計(jì)法判斷出含菌數(shù)量。
例如:10-2、10-3、10-4三級(jí)稀釋液,每級(jí)各接種5支,每支接種量1ml。經(jīng)培養(yǎng)后,生長(zhǎng)情況為:10-2級(jí)全部生長(zhǎng);10-3級(jí)2支生長(zhǎng),3支未生長(zhǎng);10-4級(jí)全部不生長(zhǎng)。生長(zhǎng)細(xì)菌的管稱陽性管,不生長(zhǎng)細(xì)菌的管稱陰性管。陰性管是由于其中未接種上細(xì)菌所致。從接種10-2、10-3、10-4三級(jí)稀釋液各5支,經(jīng)培養(yǎng)得陽性管數(shù)是5、2、0,據(jù)此可粗略推斷出供試液中含菌量是在102~103個(gè)/ml之間。
進(jìn)一步應(yīng)用數(shù)理統(tǒng)計(jì)法可計(jì)算出較精確的含菌數(shù),稱為最大可能數(shù)(Most probable num-ber,簡(jiǎn)稱 MPN)。
MPN 是建立在以下條件為基礎(chǔ)的統(tǒng)計(jì)數(shù)值,即:
①細(xì)菌不互相凝集、不相互排斥,隨機(jī)分散在被檢液體中;
②所用培養(yǎng)基應(yīng)保證每個(gè)菌細(xì)胞皆可生長(zhǎng)并在操作中不受污染;
③試管中的細(xì)胞分布符合 Poisson分布。
MPN 值、許多書中均有現(xiàn)成系列檢索表,按稀釋培養(yǎng)得到的陽性管數(shù)可直接查表。