操作技術(shù)要點(diǎn):
(1)供試品檢驗(yàn)全過(guò)程必須符合無(wú)菌技術(shù)要求。使用滅菌用具時(shí),不能接觸可能污染的任何器物,滅菌吸管不能用口吹吸。
(2)如在無(wú)菌室操作,使用乙醇燈時(shí),切勿在火焰正上方操作,以免將供試品內(nèi)細(xì)菌殺死。
(3)在凈化工作臺(tái)上操作時(shí),應(yīng)避免雙手來(lái)回出入工作臺(tái),而在無(wú)菌室操作時(shí),應(yīng)避免操作者來(lái)回出人無(wú)菌室。
(4)不溶于水的供試品必須助溶后再進(jìn)行試驗(yàn),以免造成實(shí)驗(yàn)誤差。
(5)供試品稀釋時(shí),注意每一稀釋度換1支吸管(原吸管不要吹洗)。
(6)使用滅菌吸管時(shí),管尖不要接觸可能污染的任何容器(瓶口、試管口等)或用具。
(7)在做10倍遞增稀釋時(shí),吸管插人稀釋液內(nèi)不低于2.5 cm,反復(fù)沖洗約10次,吸液高于吸管上部刻度少許,然后提起吸管貼于容器內(nèi)壁吸取1ml??拷好妫ǖ鸾佑|液面),緩慢地吹出全部供試液至第二個(gè)容器中(第一級(jí)稀釋液所用吸管勿接觸第二級(jí)稀釋液)。將吸管放入消毒筒內(nèi)。
(8)經(jīng)驗(yàn)證明,兩級(jí)稀釋與兩個(gè)平板多不能如實(shí)反映染菌量,誤差較大。宜采用三三制,即稀釋三級(jí)。每級(jí)稀釋液采用三個(gè)平皿。
(9)取供試液注平皿時(shí),要取均勻的供試液。如取上清液或沉淀物對(duì)試驗(yàn)結(jié)果必然有影響。
(10)注皿時(shí)培養(yǎng)基應(yīng)在45±1℃,高于45℃時(shí)易造成細(xì)菌受損或致死,低于45℃時(shí)易凝固,影響混勻,因此使用前可用水浴保溫效果較好。
(11)傾注培養(yǎng)基于平皿中與樣品搖勻時(shí),切勿濺到皿蓋邊和皿蓋上,以免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
(12)從供試品稀釋、注平皿、傾注培養(yǎng)基,全部操作應(yīng)在 1h 內(nèi)完成,避免由于時(shí)間過(guò)長(zhǎng),導(dǎo)致細(xì)菌細(xì)胞繁殖或死亡。