平板法是一種有條件的計(jì)數(shù)法，其限制條件大致如下：
1、細(xì)菌計(jì)數(shù)是以平板上生長(zhǎng)的菌落數(shù)為基礎(chǔ)
即每一個(gè)菌落代表一個(gè)菌細(xì)胞，亦即所謂"一對(duì)一"的關(guān)系，但實(shí)際上自然界存在的細(xì)菌常為團(tuán)塊聚集體，有的細(xì)菌其特征就是多細(xì)胞相聯(lián)，如雙球菌、四聯(lián)球菌、八疊球菌等。測(cè)定時(shí)與勻質(zhì)方式、條件關(guān)系極為密切；分散充分時(shí)，菌落生長(zhǎng)數(shù)多、反之菌落數(shù)就少。故制備供試液時(shí)，力求均勻分散。但完全分散為單個(gè)細(xì)胞也是不可能的。故細(xì)菌數(shù)測(cè)定值實(shí)際上是菌落形成單位數(shù)（Colony fomming units，CFU）；一個(gè)菌落就是一個(gè)菌落形成單位，它可以由一個(gè)也可以由多個(gè)菌細(xì)胞形成。
2. 受特定培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件限制
改變其中任一培養(yǎng)條件，就會(huì)改變被測(cè)菌類(lèi)與數(shù)量。現(xiàn)行方法適用于多數(shù)需氧或兼性厭氧細(xì)菌生長(zhǎng)，即采用營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、溫度為30~35℃、培養(yǎng)時(shí)間為48h，需氣培養(yǎng)。
美、英、日等國(guó)是用大豆酪蛋白消化物培養(yǎng)基，營(yíng)養(yǎng)條件不一，就可能導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果不一致。
3. 有繁殖能力的菌細(xì)胞才能被認(rèn)定"活菌"
因此，僅有繁殖能力的菌細(xì)胞才能形成菌落。死菌及某些受損傷的細(xì)菌或營(yíng)養(yǎng)要求苛刻的細(xì)菌不能在規(guī)定的培養(yǎng)基上形成菌落，因而不被計(jì)數(shù)。欲計(jì)數(shù)某些有特殊生長(zhǎng)要求的細(xì)菌數(shù)，須采用相應(yīng)的方法。
以上三點(diǎn)既是平板法的特殊性，也是檢驗(yàn)操作中必須重視的問(wèn)題。