今天來為重慶市無菌檢驗(yàn)員培訓(xùn)學(xué)員說說革蘭氏染色法（Gram Staining）。革蘭氏染色法（Gram Staining）是細(xì)菌學(xué)中廣泛使用的一種鑒別染色法。這種染色法利用細(xì)菌細(xì)胞壁上的生物化學(xué)性質(zhì)不同，將細(xì)菌分成兩類，即革蘭氏陽性（Gram
Positive，G+）與革蘭氏陰性（Gram Negative，G-），一起來看正文。
一、革蘭氏染色法實(shí)驗(yàn)原理
通過結(jié)晶紫初染和碘液媒染后，在細(xì)胞壁內(nèi)形成了不溶于水的結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物，革蘭氏陽性菌由于其細(xì)胞壁較厚、肽聚糖網(wǎng)層次較多且交聯(lián)致密，故遇乙醇或丙酮脫色處理時(shí)，因失水反而使網(wǎng)孔縮小，再加上它不含類脂，故乙醇處理不會(huì)出現(xiàn)縫隙，因此能把結(jié)晶紫與碘復(fù)合物牢牢留在壁內(nèi)，使其仍呈紫色。
革蘭氏陰性菌因其細(xì)胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯(lián)度差，在遇脫色劑后，以類脂為主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖網(wǎng)不能阻擋結(jié)晶紫與碘復(fù)合物的溶出，因此通過乙醇脫色后仍呈無色，再經(jīng)沙黃等紅色染料復(fù)染，就使革蘭氏陰性菌呈紅色。
二、革蘭氏染色法實(shí)驗(yàn)步驟
革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復(fù)染等四個(gè)步驟，具體操作方法如下：
1.制片：固定，操作同上；
2.初染：滴加草酸銨結(jié)晶紫染色1min，水洗；
3.媒染：滴加革蘭氏碘液（碘-碘化鉀溶液）染色1min，水洗；
4.脫色：滴加體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇，約45s后水洗；
5.復(fù)染：滴加番紅染液染色3min，水洗并使之干燥；
6.鏡檢：革蘭氏陽性菌呈紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色。
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