菌種的保存、復(fù)蘇、傳代是無(wú)菌檢驗(yàn)員必備知識(shí)和能力之一，也是無(wú)菌檢驗(yàn)員培訓(xùn)的基礎(chǔ)知識(shí)?？紤]到相關(guān)內(nèi)容較多，先來(lái)說(shuō)說(shuō)凍干菌種的復(fù)蘇。
無(wú)菌檢驗(yàn)員培訓(xùn)知識(shí)之菌種的復(fù)蘇
1、凍干菌種的復(fù)蘇
1.1復(fù)蘇菌種前應(yīng)準(zhǔn)備適于菌種生長(zhǎng)的固體、液體培養(yǎng)基和培養(yǎng)設(shè)備，所有操作均應(yīng)在合適的生物安全防護(hù)條件下進(jìn)行。
1.2用75%酒精棉擦拭西林瓶外部，在安全柜內(nèi)使用尖嘴鉗去除塑料蓋及鋁蓋，注意不要同時(shí)打開(kāi)膠塞。緩慢開(kāi)啟膠塞，用75%酒精棉消毒瓶口部分，將液體培養(yǎng)基吸取至菌株西林瓶?jī)?nèi)，溶 解凍干物。
1.3旋緊旋蓋，讓菌懸液在振蕩 器上混勻約 10s促使溶解均勻。
1.4 將菌懸液吸出，接種至液體培養(yǎng)基內(nèi)。用接種環(huán)取菌液劃線接種于瓊脂斜面培養(yǎng)基上。
1.5 將已接種的液體培養(yǎng)基及瓊脂斜面培養(yǎng)基置規(guī)定溫度下（一般細(xì)菌在30~35℃，真菌在20~25℃）培養(yǎng)24h。
1.6 取出培養(yǎng)物（第1代），仔細(xì)觀察菌苔形態(tài)、有無(wú)雜菌，必要時(shí)涂片、革蘭氏染色鏡檢，若呈典型菌落即可應(yīng)用。如發(fā)現(xiàn)菌型不典型，可進(jìn)行平板分離單菌落。
2、為保證工作用菌株的傳代次數(shù)不超過(guò)5代，并減少購(gòu)買(mǎi)凍干菌種的次數(shù)，可在對(duì)凍干菌種復(fù)蘇的同時(shí)制備部分菌懸液（第1代）冷凍保存，并將此凍存菌液復(fù)蘇后的第2代培養(yǎng)物凍存保藏。
2.1準(zhǔn)備 ：
①凍存保護(hù)液（40%無(wú)菌甘油）及滅菌凍存管。
②細(xì)菌凍存液：由液體培養(yǎng)基與凍存保護(hù)液按1：1比例混勻制成。
3、凍存菌懸液的復(fù)蘇
3.1準(zhǔn)備：
①用具：移液槍、酒精燈、接種環(huán)。
②培養(yǎng)基：根據(jù)菌種的特性選擇適宜的液體培養(yǎng)基（如營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基或改良馬丁培養(yǎng)基等）、瓊脂斜面或平板培養(yǎng)基。
③消毒液：75%酒精、0.1%新潔爾滅或84消毒液等。
3.4 將上述接種后的培養(yǎng)基在規(guī)定溫度下培養(yǎng)（細(xì)菌在30~35℃恒溫培養(yǎng)18-24小時(shí)，真菌在20~25℃恒溫培養(yǎng)24-48小時(shí)，黑曲霉*培養(yǎng)5~7天）。
3.5 仔細(xì)觀察培養(yǎng)物：如呈典型菌落即可作為日常工作中使用的菌種，注明菌名、編號(hào)、代次和接種日期后，置2~8℃冰箱內(nèi)保存；如發(fā)現(xiàn)菌苔形狀不典型，可進(jìn)行平板分離單菌落。